使用超濾離心管時，需要注意的事項
發布日期：2022-07-07 瀏覽次數：2595
超濾離心管是一種利用離心技術，用于生物樣品的分離和制備的管狀試樣容器。通過離心機高速旋轉提供的巨大離心力，使液體中的微小顆粒沉降，從而和溶液分離。離心管由高質量的透明高分子材料聚丙烯制成，廣泛應用于多種試驗操作，滿足生物分析級要求。
使用超濾離心管時，需要注意的事項：
1、選擇合適的超濾管。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。
2、新買來的超濾是干燥的，使用前加入超純水，水量*過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為準。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。不同離心機的轉速rpm換算成g之后，有所不同。離心機的加速度調至Z低檔，減小對膜的壓力。注意，一定要等離心機達到目的轉速之后，方可離開離心機，否則離心機出問題時，無法第一時間處理。膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時，取50ul緩沖溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mgml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測，繼續加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉淀，導致堵管。若發生沉淀，要確定沉淀的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，后者的方法是換不同的緩沖溶液，直到蛋白不發生沉淀為止。
